第2课时　动物细胞融合技术与单克隆抗体 [学习目标]　1.阐明动物细胞融合技术的概念，举例说出诱导动物细胞融合的方法。2.概述单克隆抗体的制备过程。 一、动物细胞融合技术 1．概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。 2．原理：细胞膜的流动性。 3．诱导融合的方法 特别提醒　灭活病毒诱导细胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 4．意义：细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 5．应用 (1)成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。 (2)用于制造单克隆抗体。 判断正误 (1)与植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导因素有聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒(　　) (2)灭活的含义是用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构(　　) 答案　(1)×　(2)√ 提示　(1)与植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导因素是灭活的病毒。 任务一：动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较 1．19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中，观察到多核细胞。如何解释这一现象？ 提示　病人体内的病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。 2．比较动物细胞融合技术和植物体细胞杂交技术 (1)原理不同：动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性；植物体细胞杂交技术的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。 (2)诱导方法不同：两者都可用聚乙二醇(PEG)融合法和电融合法诱导融合；但动物细胞还可用灭活病毒诱导法诱导细胞融合。 (3)最终结果不同：动物细胞融合最终得到的是杂交细胞，而植物体细胞杂交技术最终得到的是杂种植株。 1．如图表示仙台病毒诱导动物细胞融合的部分过程，下列叙述正确的是(　　) A．细胞A和细胞B必须为同种细胞才能融合 B．细胞C同时有细胞A和细胞B的遗传物质 C．该融合过程体现了细胞膜具有选择透过性 D．此过程的原理是动物细胞具有全能性 答案　B 解析　不同种的细胞也能融合，如人、鼠细胞融合，A错误；如图所示，细胞A、B融合成一个细胞C，细胞C同时有细胞A和细胞B的遗传物质，B正确；该融合过程体现了细胞膜具有流动性，C错误；此过程的原理是动物细胞膜具有流动性，D错误。 2．对比动物细胞融合和植物体细胞杂交技术，下列论述合理的是(　　) A．均可使用PEG、电融合或灭活病毒诱导细胞融合 B．两者都可以跨越种属间的生殖隔离 C．两者都可以体现细胞的全能性 D．在适宜的条件下，均可产生完整个体 答案　B 解析　灭活病毒是动物细胞融合特有的诱导因素，A错误；动物细胞融合和植物体细胞杂交技术都可以打破生殖隔离，B正确；植物体细胞杂交技术体现了细胞的全能性，动物细胞融合技术体现了细胞膜具有流动性，C错误；目前，动物细胞融合技术不能产生完整个体，D错误。 二、单克隆抗体及其应用 1．传统抗体的获得 (1)方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。 (2)缺陷：产量低、纯度低、特异性差。 2．单克隆抗体的制备 (1)大量制备单一抗体的思路 (2)存在的问题：B淋巴细胞不可能无限增殖。 (3)解决方案 (4)制备过程 3．单克隆抗体的优点 (1)能准确地识别抗原的细微差异。 (2)可以与特定抗原发生特异性结合。 (3)可以大量制备。 4．单克隆抗体的应用 (1)用作诊断试剂，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。 (2)运载药物，如ADC(抗体—药物偶联物)。 (3)直接用于治疗疾病。 判断正误 (1)B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后，得到的都是杂交瘤细胞(　　) (2)单克隆抗体制备过程中两次筛选的目的相同(　　) (3)ADC的抗体具有靶向运输作用、药物具有治疗作用(　　) 答案　(1)×　(2)×　(3)√ 提示　(1)B淋巴细胞与骨髓瘤细胞如两两融合，得到的融合细胞有3种，即B淋巴细胞自身融合细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞和杂交瘤细胞，需要筛选才能得到杂交瘤细胞。(2)单克隆抗体制备过程中第一次筛选是为了筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选是为了获得能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。 任务二：单克隆抗体的制备过程和单克隆抗体的应用 1．根据单克隆抗体的制备过程，回答以下问题： (1)给小鼠注射特定抗原的目的是使小鼠产生能分泌特定抗体的B淋巴细胞。 (2)B淋巴细胞与骨髓瘤细胞经诱导融合后，培养基中共出现5种细胞。若只考虑两两融合，理论上培养基中融合的细胞有3种。体系中出现多种类型细胞的原因是细胞融合是随机的，且融合率达不到100%。 (3)单克隆抗体制备过程中，第一次筛选的目的是筛选出杂交瘤细胞。 (4)资料：①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。 ②免疫的B淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但它不能分裂增殖，其本身也不能在体外长期存活。 ③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但它能不断分裂增殖。如果它的D途径被阻断的话，它会因不能合成DNA而死亡。 根据上述资料可知，第一次筛选的方法是用特定的选择培养基进行筛选。培养基中加入氨基蝶呤。 (5)单克隆抗体制备过程中，第二次筛选的目的是筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。方法是抗体检测。其原理是抗原—抗体的特异性结合。 2．阅读教材“思考·讨论：单克隆抗体的应用”，回答以下问题： (1)ADC的抗体主要发挥靶向运输作用，即通过特异性结合靶细胞表面的抗原，将连接的药物输送到靶细胞；药物发挥治疗效应，如杀伤靶细胞。 (2)除了细胞毒素，还可以用放射性同位素标记单克隆抗体进行靶向放疗。一些作用于细胞信号转导通路的药物可以通过阻断肿瘤细胞的信号通路来抑制其生长，理论上也可以将这些药物与单克隆抗体结合进行肿瘤治疗。 (3)单克隆抗体诊断试剂盒和ADC在临床应用上具有的优势：单克隆抗体诊断试剂盒中的单克隆抗体只与特定的抗原发生反应，因此检测的特异性和灵敏度大大提高；生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可以传代培养、冷冻保存和复苏利用，有利于控制产品的质量和标准化生产诊断试剂盒。ADC在临床上具有靶点清楚、毒副作用小等优点，原因是ADC中的单克隆抗体能将细胞毒素定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞，不损伤正常细胞。 　杂交瘤细胞的抗体检测和克隆化培养 融合后的细胞经特定的选择培养基筛选培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用96孔板培养，使每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需要进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为能产生特定抗体的杂交瘤细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。 3．(2023·北京，12)甲状旁腺激素(PTH)水平是人类多种疾病的重要诊断指标。研究者制备单克隆抗体用于快速检测PTH，有关制备过程的叙述不正确的是(　　) A．需要使用动物细胞培养技术 B．需要制备用PTH免疫的小鼠 C．利用抗原—抗体结合的原理筛选杂交瘤细胞 D．筛选能分泌多种抗体的单个杂交瘤细胞 答案　D 解析　单克隆抗体制备过程中需要对骨髓瘤细胞等进行培养，即需要使用动物细胞培养技术，A正确；该操作的目的是制备单克隆抗体用于快速检测PTH，故应用PTH刺激小鼠，使其产生相应的B淋巴细胞，B正确；抗原与抗体的结合具有特异性，可利用抗原—抗体结合的原理筛选杂交瘤细胞，C正确；由于一个B淋巴细胞经分化形成浆细胞后通常只能产生一种抗体，故筛选出的单个杂交瘤细胞无法分泌多种抗体，D错误。 4．将特定药物与单克隆抗体相结合制成的“生物导弹”，能够用于杀死人类某些癌细胞，其过程如图所示。“生物导弹”主要由两部分组成，一是“瞄准装置”，二是杀伤性“弹头”。下列相关叙述错误的是(　　) A．“脾脏中的细胞”是从经免疫处理的实验动物中获取的B淋巴细胞 B．杂交瘤细胞在培养瓶中培养时不会出现接触抑制的现象 C．“瞄准装置”是指能够特异性识别癌细胞的单克隆抗体 D．构成“弹头”的抗癌药物具有选择性杀伤癌细胞的功能 答案　D 解析　杂交瘤细胞具有骨髓瘤细胞的特点，细胞膜上的糖蛋白等物质减少，可以无限增殖，在培养瓶中培养时不会出现接触抑制，B正确；构成“弹头”的抗癌药物没有特异性，“瞄准装置”中的单克隆抗体能将药物带到特定部位，从而选择性杀伤癌细胞，D错误。 课时对点练　[分值：100分] 第1～7题，每题5分；第8～12题，每题6分，共65分。 题组一　动物细胞融合技术 1．与植物体细胞杂交相比，动物细胞融合的原理及其特有的诱导方法分别是(　　) A．细胞膜的流动性、离心 B．细胞膜的流动性、灭活病毒诱导法 C．细胞的全能性、电融合法 D．细胞的全能性、灭活病毒诱导法 答案　B 解析　植物体细胞杂交的原理是细胞膜的流动性、植物细胞的全能性，动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性；动物细胞融合常用的方法有PEG融合法、灭活病毒诱导法、电融合法等，其中灭活病毒诱导法是其特有的诱导方法，而PEG融合法、电融合法也可用于诱导植物体细胞杂交。 2．下列关于动物细胞融合技术的叙述，错误的是(　　) A．细胞融合技术能应用于细胞遗传、细胞免疫等研究 B．动物细胞融合的成功是细胞膜具有流动性的有力证据 C．动物细胞融合的基本原理与植物原生质体融合的基本原理不同 D．除了化学法和物理法外，动物细胞融合还可以由灭活病毒诱导 答案　C 解析　动物细胞融合与植物原生质体融合的原理都是细胞膜的流动性，C错误。 3．(2024·马鞍山高二调研)如图表示A、B两种动物细胞融合的一些过程。下列有关说法错误的是(　　) A．需要用物理或化学手段使仙台病毒失去感染能力 B．图中C细胞进行的细胞分裂方式为有丝分裂 C．将A、B细胞等量混合诱导得到的融合细胞即为杂交细胞 D．动物细胞融合技术为制备单克隆抗体开辟了新的途径 答案　C 解析　若只考虑两两融合，将A、B细胞等量混合诱导得到的融合细胞有三种(融合的具有同种核的细胞和杂交细胞)，C错误。 题组二　单克隆抗体及其应用 4．下列关于单克隆抗体制备的说法，正确的是(　　) A．将特定抗原注射到小鼠体内，可以从小鼠血清中获得单克隆抗体 B．经特定抗原免疫过的B淋巴细胞在体外培养时可分泌单克隆抗体 C．培养杂交瘤细胞必须提供动物血清 D．筛选出杂交瘤细胞后，需利用特定抗原再次筛选分泌所需抗体的细胞 答案　D 解析　向小鼠体内注射特定的抗原，可以从小鼠血清中获得抗体，但此时的抗体不是单克隆抗体，A错误；经特定抗原免疫过的B淋巴细胞在体外无增殖能力，无法通过培养获得单克隆抗体，B错误；培养杂交瘤细胞可以采用体内培养法和体外培养法，其中体内培养法不需要提供动物血清，C错误。 5．(2024·漳州高二期中)研究表明，髓系细胞触发受体2(TREM2)是一种免疫抑制受体，在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。因此，TREM2抗体药物有望提高肿瘤免疫疗法的疗效。如图为TREM2单克隆抗体的制备流程图，下列说法正确的是(　　) A．步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射TREM2蛋白和分泌TREM2抗体的杂交瘤细胞 B．从小鼠脾脏中获得B细胞，因为脾脏是B细胞产生和成熟的场所 C．可将杂交瘤细胞注入小鼠血液中实现单克隆抗体的大规模生产 D．步骤③和④的培养孔中均含有TREM2蛋白，依据的原理都是抗原—抗体特异性结合 答案　A 解析　B细胞在骨髓中产生和成熟，B错误；可将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔中实现单克隆抗体的大规模生产，C错误；步骤③是用特定的选择培养基筛选杂交瘤细胞，步骤④的原理是抗原—抗体特异性结合，D错误。 6．如图表示抗人体胃癌的单克隆抗体的制备过程，下列有关叙述不正确的是(　　) A．图中实验小鼠注射的甲是能与抗人体胃癌抗体特异性结合的抗原 B．利用PEG融合法、灭活病毒诱导法和电融合法等均可诱导细胞融合获得乙 C．用特定的选择培养基对乙筛选，融合细胞均能生长，未融合细胞均不能生长 D．丙需进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选后可获得大量能分泌所需抗体的丁 答案　C 解析　选择培养基只能让特定的符合条件的细胞存活下来，在题目给定的选择培养基上，只有杂交瘤细胞才能够存活，C错误。 7．(2022·山东，15)如图所示，将由2种不同的抗原分别制备的单克隆抗体分子，在体外解偶联后重新偶联可制备双特异性抗体，简称双抗。下列说法错误的是(　　) A．双抗可同时与2种抗原结合 B．利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞 C．筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原 D．同时注射2种抗原可刺激B细胞分化为产双抗的浆细胞 答案　D 解析　根据抗原和抗体发生特异性结合的原理推测，双抗可同时与2种抗原结合，A正确；根据抗原与抗体能够发生特异性结合的特性，利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞，从而使药物发挥相应的作用，B正确；由于双抗是在两种不同的抗原刺激下，B细胞增殖、分化产生不同的浆细胞分泌形成的，因此，筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原来进行抗原—抗体检测，从而实现对双抗的筛选，C正确；同时注射2种抗原可刺激B细胞分化形成不同的浆细胞，而不是分化成产双抗的浆细胞，D错误。 8．科学家将能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体与药物结合，制成了抗体—药物偶联物(ADC)，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。下列叙述错误的是(　　) A．ADC由抗体、接头和药物三部分组成 B．ADC可与肿瘤细胞表面受体特异性结合 C．ADC进入细胞的过程依赖膜的流动性 D．单克隆抗体可特异性地杀伤肿瘤细胞 答案　D 解析　该单克隆抗体不能杀伤肿瘤细胞，而是与药物结合，将药物带到特定部位，利用药物杀伤肿瘤细胞，D错误。 9．(2024·新乡高二检测)为制备抗犬冠状病毒(CCV，RNA病毒)特异性单克隆抗体，以灭活的CCV为抗原免疫小鼠4次，将提取的小鼠B淋巴细胞与骨髓瘤细胞用聚乙二醇诱导细胞融合，通过两次筛选获得抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞，经克隆化培养，获得稳定分泌抗CCV单克隆抗体的杂交瘤细胞。下列叙述正确的是(　　) A．免疫小鼠4次的目的是增加小鼠体内的单克隆抗体的量 B．实验中使用的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞在单独培养时均会出现接触抑制现象 C．诱导后需进行两次筛选，第一次筛选的目的是筛选出既能无限增殖又能产生所需抗体的杂交瘤细胞 D．利用CCV对杂交瘤细胞进行抗体检测可获得分泌特定抗体的杂交瘤细胞 答案　D 解析　免疫小鼠4次的目的是通过多次免疫，让小鼠体内产生更多的能产生特异性抗体的B淋巴细胞，A错误；骨髓瘤细胞在单独培养时不会出现接触抑制现象，B错误；诱导后需进行两次筛选，第一次筛选的目的是筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选的目的是筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞，C错误。 10．(2022·江苏，19改编)如图表示利用细胞融合技术进行基因定位的过程，在人—鼠杂种细胞中人的染色体会以随机方式丢失，通过分析基因产物进行基因定位。现检测细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中人的4种酶活性，只有Ⅱ具有芳烃羟化酶活性，只有Ⅲ具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脱氢酶活性。下列相关叙述错误的是(　　) A．加入灭活仙台病毒的作用是促进细胞融合 B．细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分别为人—人、人—鼠、鼠—鼠融合细胞 C．芳烃羟化酶基因位于2号染色体上，乳酸脱氢酶基因位于11号染色体上 D．胸苷激酶基因位于17号染色体上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色体上 答案　B 解析　动物细胞融合过程中，可以利用聚乙二醇或灭活的病毒作诱导剂促进细胞融合，A正确；细胞Ⅲ中保留了人的X、11、17号染色体，故不会是鼠—鼠融合细胞，B错误；根据题意和题图分析可知，芳烃羟化酶基因位于2号染色体上，乳酸脱氢酶基因位于11号染色体上，胸苷激酶基因位于17号染色体上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色体上，C、D正确。 11．如图是科研人员将药物与单克隆抗体连接形成的抗体—药物偶联物 (ADC) 的示意图，它由抗体、接头和小分子药物三部分组成，能实现对肿瘤细胞的选择性杀伤。例如，用于治疗乳腺癌的Kadcyla是由曲妥珠单抗和药物美坦新偶联的ADC。下列叙述不正确的是(　　) A．单克隆抗体由杂交瘤细胞以胞吐方式释放体现了细胞膜的流动性 B．药物美坦新识别并杀伤乳腺癌细胞体现了抗原—抗体的特异性结合 C．ADC中接头稳定性偏低，会导致药物分子容易脱落，对正常细胞造成损伤 D．ADC设计需要综合考虑抗体选择、药物分子大小及其细胞毒性等问题 答案　B 解析　药物美坦新并不具有识别作用，单克隆抗体才具有识别作用，B错误。 12．如图，核苷酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶。制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞缺乏转化酶。现用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”来筛选特定的杂交瘤细胞。下列关于筛选原理的叙述，正确的是(　　) A．免疫的B淋巴细胞及其相互融合的细胞因全合成途径被A阻断，在HAT培养基上不能增殖 B．骨髓瘤细胞及其相互融合的细胞因无法进行上述两个途径，而在HAT培养基上不能增殖 C．杂交瘤细胞因为可进行上述两个途径，能在HAT培养基上大量增殖 D．HAT培养基上筛选出的所有杂交瘤细胞，既能大量增殖又能产生较高纯度的目标抗体 答案　B 解析　免疫的B淋巴细胞及其相互融合的细胞是正常细胞，细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，但因高度分化而不能增殖，A错误；骨髓瘤细胞及其相互融合的细胞因骨髓瘤细胞中缺乏转化酶，无法进行补救合成途径，而在HAT培养基上不能增殖，B正确；杂交瘤细胞因为可进行补救合成途径，能在HAT培养基上大量繁殖，C错误；HAT培养基上筛选出的杂交瘤细胞能大量增殖，但并不都能产生高纯度的目标抗体，需要进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞，D错误。 13．(20分)(2024·成都高二调研)为降低乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体—药物偶联物(ADC)，过程如图1所示。请回答下列问题： (1)本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自____________________。 (2)步骤②的细胞必须经过步骤③才能筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，杂交瘤细胞的特点是_______________________________________________________________________________。杂交瘤细胞可采用注射到小鼠腹腔内培养或进行___________________________________培养的方式进行扩大培养。 (3)单克隆抗体的特点是_____________________________________________(至少答出两点)。 (4)步骤④是将获得的a____________和b________________这两部分，通过接头结合在一起，从而获得ADC。 (5)研究发现，ADC在患者体内的作用如图2所示。 ①ADC能降低乳腺癌治疗药物的副作用，是因为____________能精确地定位乳腺癌细胞，该过程依赖于_______________________________________________________反应。 ②ADC进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其____________，释放出的药物最终作用于____________，可导致癌细胞凋亡。 答案　(1)人的乳腺癌细胞　(2)既能大量增殖，又能产生特定抗体　体外　(3)能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备　(4)单克隆抗体　治疗乳腺癌的药物　(5)①单克隆抗体　抗原—抗体的特异性结合　②水解　细胞核 14．(每空3分，共15分)(2023·湖北，22节选)某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。回答下列问题： (1)与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫的脾细胞(含浆细胞)________(填“需要”或“不需要”)通过原代培养扩大细胞数量；添加脂溶性物质PEG可促进细胞融合，该过程中PEG对细胞膜的作用是_____________________________________________________________________。 (2)在杂交瘤细胞筛选过程中，常使用特定的选择培养基(如HAT培养基)，该培养基对________________________和____________________生长具有抑制作用。 (3)单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，其目的是____________________。 答案　(1)不需要　使细胞接触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合　(2)未融合的亲本细胞　融合的具有同种核的细胞　(3)通过抗体检测呈阳性来获得分泌所需抗体的杂交瘤细胞 解析　(1)浆细胞是高度分化的细胞，不能增殖，所以不能通过原代培养扩大细胞数量。脂溶性物质PEG可使细胞接触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。(2)在杂交瘤细胞筛选过程中，常用特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。(3)单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，是运用了抗原—抗体杂交技术，抗体检测呈阳性的细胞，即为所需的杂交瘤细胞。 学科网（北京）股份有限公司 $ 第2课时 动物细胞融合技术与单克隆抗体 第2章 细胞工程 <<< 学习目标 1.阐明动物细胞融合技术的概念，举例说出诱导动物细胞融合的方法。 2.概述单克隆抗体的制备过程。 内容索引 一、动物细胞融合技术 二、单克隆抗体及其应用 课时对点练 动物细胞融合技术 一 4 1.概念：使 或 动物细胞结合形成 的技术。 2.原理： 。 两个 梳理　教材新知 3.诱导融合的方法 PEG融合法 法 法 多个 一个细胞 细胞膜的流动性 电融合 灭活病毒诱导 特别提醒 灭活病毒诱导细胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 4.意义：细胞融合技术突破了 的局限，使 成为可能。 5.应用 (1)成为研究细胞 、细胞 、肿瘤和培育 等的重要手段。 (2)用于制造 。 有性杂交 远缘杂交 遗传 免疫 生物新品种 单克隆抗体 (1)与植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导因素有聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒(　　) 提示　与植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导因素是灭活的病毒。 (2)灭活的含义是用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构(　　) × √ 判断正误 8 任务一：动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较 1.19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中，观察到多核细胞。如何解释这一现象？ 探究　核心知识 提示　病人体内的病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。 2.比较动物细胞融合技术和植物体细胞杂交技术 (1)原理不同：动物细胞融合的原理是 ；植物体细胞杂交技术的原理是 。 (2)诱导方法不同：两者都可用 和 诱导融合；但动物细胞还可用 诱导细胞融合。 (3)最终结果不同：动物细胞融合最终得到的是 ，而植物体细胞杂交技术最终得到的是 。 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 聚乙二醇(PEG)融合法 电融合法 灭活病毒诱导法 杂交细胞 杂种植株 1.如图表示仙台病毒诱导动物细胞融合的部分过程，下列叙述正确的是 A.细胞A和细胞B必须为同种细胞才能融合 B.细胞C同时有细胞A和细胞B的遗传物质 C.该融合过程体现了细胞膜具有选择透过性 D.此过程的原理是动物细胞具有全能性 √ 落实　思维方法 不同种的细胞也能融合，如人、鼠细胞融合，A错误； 如图所示，细胞A、B融合成一个细胞C，细胞C同时有细胞A和细胞B的遗传物质，B正确； 该融合过程体现了细胞膜具有流动性，C错误； 此过程的原理是动物细胞膜具有流动性，D错误。 2.对比动物细胞融合和植物体细胞杂交技术，下列论述合理的是 A.均可使用PEG、电融合或灭活病毒诱导细胞融合 B.两者都可以跨越种属间的生殖隔离 C.两者都可以体现细胞的全能性 D.在适宜的条件下，均可产生完整个体 √ 灭活病毒是动物细胞融合特有的诱导因素，A错误； 动物细胞融合和植物体细胞杂交技术都可以打破生殖隔离，B正确； 植物体细胞杂交技术体现了细胞的全能性，动物细胞融合技术体现了细胞膜具有流动性，C错误； 目前，动物细胞融合技术不能产生完整个体，D错误。 二 单克隆抗体及其应用 15 1.传统抗体的获得 (1)方法：向动物体内反复注射某种 ，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需 。 (2)缺陷： 、纯度低、 。 2.单克隆抗体的制备 (1)大量制备单一抗体的思路 梳理　教材新知 抗原 抗体 产量低 特异性差 (2)存在的问题：B淋巴细胞 。 (3)解决方案 大量增殖 不可能无限增殖 特定 (4)制备过程 淋巴 细胞 B 杂交 细胞 杂交 瘤 能分泌 所需抗 体 3.单克隆抗体的优点 (1)能准确地识别 的细微差异。 (2)可以与特定抗原发生 结合。 (3)可以 制备。 4.单克隆抗体的应用 (1)用作 ，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。 (2)运载药物，如ADC(抗体—药物偶联物)。 (3)直接用于治疗疾病。 抗原 特异性 大量 诊断试剂 (1)B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后，得到的都是杂交瘤细胞(　　) 提示　B淋巴细胞与骨髓瘤细胞如两两融合，得到的融合细胞有3种，即B淋巴细胞自身融合细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞和杂交瘤细胞，需要筛选才能得到杂交瘤细胞。 (2)单克隆抗体制备过程中两次筛选的目的相同(　　) 提示　单克隆抗体制备过程中第一次筛选是为了筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选是为了获得能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。 (3)ADC的抗体具有靶向运输作用、药物具有治疗作用(　　) × × √ 判断正误 20 任务二：单克隆抗体的制备过程和单克隆抗体的应用 1.根据单克隆抗体的制备过程，回答以下问题： (1)给小鼠注射特定抗原的目的是__________________________________ 。 (2)B淋巴细胞与骨髓瘤细胞经诱导融合后，培养基中共出现 种细胞。若只考虑两两融合，理论上培养基中融合的细胞有 种。体系中出现多种类型细胞的原因是 。 (3)单克隆抗体制备过程中，第一次筛选的目的是 。 探究　核心知识 使小鼠产生能分泌特定抗体的B淋巴 细胞 5 3 细胞融合是随机的，且融合率达不到100% 筛选出杂交瘤细胞 (4)资料：①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。 ②免疫的B淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但它不能分裂增殖，其本身也不能在体外长期存活。 ③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但它能不断分裂增殖。如果它的D途径被阻断的话，它会因不能合成DNA而死亡。 根据上述资料可知，第一次筛选的方法是用 进行筛选。培养基中加入 。 (5)单克隆抗体制备过程中，第二次筛选的目的是____________________ 。方法是 。其原理是 。 特定的选择培养基 氨基蝶呤 筛选出能分泌所需抗体 的杂交瘤细胞 抗体检测 抗原—抗体的特异性结合 2.阅读教材“思考·讨论：单克隆抗体的应用”，回答以下问题： (1)ADC的抗体主要发挥 作用，即通过______________________ ，将连接的药物输送到 ；药物发挥 ，如 。 (2)除了细胞毒素，还可以用 进行靶向放疗。一些作用于 的药物可以通过阻断肿瘤细胞的信号通路来抑制其生长，理论上也可以将这些药物与单克隆抗体结合进行肿瘤治疗。 靶向运输 特异性结合靶细胞表面的 抗原 靶细胞 治疗效应 杀伤靶细胞 放射性同位素标记单克隆抗体 细胞信号转导通路 (3)单克隆抗体诊断试剂盒和ADC在临床应用上具有的优势：单克隆抗体诊断试剂盒中的单克隆抗体只与 发生反应，因此检测的特异性和灵敏度大大提高；生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可以传代培养、冷冻保存和复苏利用，有利于控制产品的质量和标准化生产诊断试剂盒。ADC在临床上具有 等优点，原因是____________ ____________________________________________________________________________。 特定的抗原 靶点清楚、毒副作用小 ADC中的单克 隆抗体能将细胞毒素定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞，不损伤正常细胞 杂交瘤细胞的抗体检测和克隆化培养 核心归纳 融合后的细胞经特定的选择培养基筛选培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用96孔板培养，使每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需要进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为能产生特定抗体的杂交瘤细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。 3.(2023·北京，12)甲状旁腺激素(PTH)水平是人类多种疾病的重要诊断指标。研究者制备单克隆抗体用于快速检测PTH，有关制备过程的叙述不正确的是 A.需要使用动物细胞培养技术 B.需要制备用PTH免疫的小鼠 C.利用抗原—抗体结合的原理筛选杂交瘤细胞 D.筛选能分泌多种抗体的单个杂交瘤细胞 √ 落实　思维方法 单克隆抗体制备过程中需要对骨髓瘤细胞等进行培养，即需要使用动物细胞培养技术，A正确； 该操作的目的是制备单克隆抗体用于快速检测PTH，故应用PTH刺激小鼠，使其产生相应的B淋巴细胞，B正确； 抗原与抗体的结合具有特异性，可利用抗原—抗体结合的原理筛选杂交瘤细胞，C正确； 由于一个B淋巴细胞经分化形成浆细胞后通常只能产生一种抗体，故筛选出的单个杂交瘤细胞无法分泌多种抗体，D错误。 4.将特定药物与单克隆抗体相结合制成的“生物导弹”，能够用于杀死人类某些癌细胞，其过程如图所示。“生物导弹”主要由两部分组成，一是“瞄准装置”，二是杀伤性“弹头”。下列相关叙述错误的是 A.“脾脏中的细胞”是从经免疫处理的实验动物中获取的B淋巴细胞 B.杂交瘤细胞在培养瓶中培养时不会出现接触抑制的现象 C.“瞄准装置”是指能够特异性识别癌细胞的单克隆抗体 D.构成“弹头”的抗癌药物具有选择性杀伤癌细胞的功能 √ 杂交瘤细胞具有骨髓瘤细胞的特点，细胞膜上的糖蛋白等物质减少，可以无限增殖，在培养瓶中培养时不会出现接触抑制，B正确； 构成“弹头”的抗癌药物没有特异性，“瞄准装置”中的单克隆抗体能将药物带到特定部位，从而选择性杀伤癌细胞，D错误。 网络构建 课时对点练 三 31 题组一　动物细胞融合技术 1.与植物体细胞杂交相比，动物细胞融合的原理及其特有的诱导方法分别是 A.细胞膜的流动性、离心 B.细胞膜的流动性、灭活病毒诱导法 C.细胞的全能性、电融合法 D.细胞的全能性、灭活病毒诱导法 √ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 对点训练 植物体细胞杂交的原理是细胞膜的流动性、植物细胞的全能性，动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性；动物细胞融合常用的方法有PEG融合法、灭活病毒诱导法、电融合法等，其中灭活病毒诱导法是其特有的诱导方法，而PEG融合法、电融合法也可用于诱导植物体细胞杂交。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 对点训练 动物细胞融合与植物原生质体融合的原理都是细胞膜的流动性，C错误。 2.下列关于动物细胞融合技术的叙述，错误的是 A.细胞融合技术能应用于细胞遗传、细胞免疫等研究 B.动物细胞融合的成功是细胞膜具有流动性的有力证据 C.动物细胞融合的基本原理与植物原生质体融合的基本原理不同 D.除了化学法和物理法外，动物细胞融合还可以由灭活病毒诱导 √ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 对点训练 3.(2024·马鞍山高二调研)如图表示A、B两种动物细胞融合的一些过程。下列有关说法错误的是 A.需要用物理或化学手 段使仙台病毒失去感 染能力 B.图中C细胞进行的细胞分裂方式为有丝分裂 C.将A、B细胞等量混合诱导得到的融合细胞即为杂交细胞 D.动物细胞融合技术为制备单克隆抗体开辟了新的途径 √ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 对点训练 若只考虑两两融合，将A、B细胞等量混合诱导得到的融合细胞有三种(融合的具有同种核的细胞和杂交细胞)，C错误。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 对点训练 题组二　单克隆抗体及其应用 4.下列关于单克隆抗体制备的说法，正确的是 A.将特定抗原注射到小鼠体内，可以从小鼠血清中获得单克隆抗体 B.经特定抗原免疫过的B淋巴细胞在体外培养时可分泌单克隆抗体 C.培养杂交瘤细胞必须提供动物血清 D.筛选出杂交瘤细胞后，需利用特定抗原再次筛选分泌所需抗体的细胞 √ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 对点训练 向小鼠体内注射特定的抗原，可以从小鼠血清中获得抗体，但此时的抗体不是单克隆抗体，A错误； 经特定抗原免疫过的B淋巴细胞在体外无增殖能力，无法通过培养获得单克隆抗体，B错误； 培养杂交瘤细胞可以采用体内培养法和体外培养法，其中体内培养法不需要提供动物血清，C错误。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 对点训练 5.(2024·漳州高二期中)研究表明，髓系细胞触发受体2(TREM2)是一种免疫抑制受体，在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。因此，TREM2抗体药物有望提高肿瘤免疫疗法的疗效。如图为TREM2单克隆抗体的制备流程图，下列说法正确的是 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 对点训练 A.步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射TREM2蛋白和分泌TREM2抗体的杂交 瘤细胞 B.从小鼠脾脏中获得B细胞，因为脾脏是B细胞产生和成熟的场所 C.可将杂交瘤细胞注入小鼠血液中实现单克隆抗体的大规模生产 D.步骤③和④的培养孔中均含有TREM2蛋白，依据的原理都是抗原—抗 体特异性结合 √ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 对点训练 B细胞在骨髓中产生和成熟，B错误； 可将杂交瘤细胞注入 小鼠腹腔中实现单克 隆抗体的大规模生产， C错误； 步骤③是用特定的选择培养基筛选杂交瘤细胞，步骤④的原理是抗原—抗体特异性结合，D错误。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 对点训练 6.如图表示抗人体胃癌的单克隆抗体的制备过程，下列有关叙述不正确的是 A.图中实验小鼠注射的甲是能与抗人体胃癌抗体特异性结合的抗原 B.利用PEG融合法、灭活病毒诱导法和电融合法等均可诱导细胞融合获得乙 C.用特定的选择培养基对 乙筛选，融合细胞均能 生长，未融合细胞均不 能生长 D.丙需进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选后可获得大量能分泌所 需抗体的丁 √ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 对点训练 选择培养基只能让特定的符合条件的细胞存活下来，在题目给定的选择培养基上，只有杂交瘤细胞才能够存活，C错误。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 对点训练 7.(2022·山东，15)如图所示，将由2种不同的抗原分别制备的单克隆抗体分子，在体外解偶联后重新偶联可制备双特异性抗体，简称双抗。下列说法错误的是 A.双抗可同时与2种抗原结合 B.利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞 C.筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原 D.同时注射2种抗原可刺激B细胞分化为产双抗的浆细胞 √ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 对点训练 根据抗原和抗体发生特异性结合的原理推测，双抗可同时与2种抗原结合，A正确； 根据抗原与抗体能够发生特异性结合的 特性，利用双抗可以将蛋白类药物运送 至靶细胞，从而使药物发挥相应的作用，B正确； 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 对点训练 由于双抗是在两种不同的抗原刺激下，B细胞增殖、分化产生不同的浆细胞分泌形成的，因此，筛选双抗时需 使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原来 进行抗原—抗体检测，从而实现对双抗的 筛选，C正确； 同时注射2种抗原可刺激B细胞分化形成不同的浆细胞，而不是分化成产双抗的浆细胞，D错误。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 对点训练 8.科学家将能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体与药物结合，制成了抗体—药物偶联物(ADC)，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。下列叙述错误的是 A.ADC由抗体、接头和 药物三部分组成 B.ADC可与肿瘤细胞表 面受体特异性结合 C.ADC进入细胞的过程依赖膜的流动性 D.单克隆抗体可特异性地杀伤肿瘤细胞 √ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 对点训练 该单克隆抗体不能杀伤肿瘤细胞，而是与药物结合，将药物带到特定部位，利用药物杀伤肿瘤细胞，D错误。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 对点训练 9.(2024·新乡高二检测)为制备抗犬冠状病毒(CCV，RNA病毒)特异性单克隆抗体，以灭活的CCV为抗原免疫小鼠4次，将提取的小鼠B淋巴细胞与骨髓瘤细胞用聚乙二醇诱导细胞融合，通过两次筛选获得抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞，经克隆化培养，获得稳定分泌抗CCV单克隆抗体的杂交瘤细胞。下列叙述正确的是 A.免疫小鼠4次的目的是增加小鼠体内的单克隆抗体的量 B.实验中使用的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞在单独培养时均会出现接触抑制现象 C.诱导后需进行两次筛选，第一次筛选的目的是筛选出既能无限增殖又能产生所 需抗体的杂交瘤细胞 D.利用CCV对杂交瘤细胞进行抗体检测可获得分泌特定抗体的杂交瘤细胞 √ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 免疫小鼠4次的目的是通过多次免疫，让小鼠体内产生更多的能产生特异性抗体的B淋巴细胞，A错误； 骨髓瘤细胞在单独培养时不会出现接触抑制现象，B错误； 诱导后需进行两次筛选，第一次筛选的目的是筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选的目的是筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞，C错误。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 10.(2022·江苏，19改编)如图表示利用细胞融合技术进行基因定位的过程，在人—鼠杂种细胞中人的染色体会以随机方式丢失，通过分析基因产物进行基因定位。现检测细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中人的4种酶活性，只有Ⅱ具有芳烃羟化酶活性，只有Ⅲ具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脱氢酶活性。下列相关叙述错误的是 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 A.加入灭活仙台病毒的作用是促进细 胞融合 B.细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分别为人—人、人 —鼠、鼠—鼠融合细胞 C.芳烃羟化酶基因位于2号染色体上， 乳酸脱氢酶基因位于11号染色体上 D.胸苷激酶基因位于17号染色体上， 磷酸甘油酸激酶基因位于X染色体上 √ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 动物细胞融合过程中，可以利用聚乙二醇或灭活的病毒作诱导剂促进细胞融合，A正确； 细胞Ⅲ中保留了人的X、11、17号染色体，故不会是鼠—鼠融合细胞，B错误； 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 根据题意和题图分析可知，芳烃羟化酶基因位于2号染色体上，乳酸脱氢酶基因位于11号染色体上，胸苷激酶基因位于17号染色体上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色体上，C、D正确。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 11.如图是科研人员将药物与单克隆抗体连接形成的抗体—药物偶联物 (ADC) 的示意图，它由抗体、接头和小分子药物三部分组成，能实现对肿瘤细胞的选择性杀伤。例如，用于治疗乳腺癌的Kadcyla是由曲妥珠单抗和药物美坦新偶联的ADC。下列叙述不正确的是 A.单克隆抗体由杂交瘤细胞以胞吐方式释放体现了细胞 膜的流动性 B.药物美坦新识别并杀伤乳腺癌细胞体现了抗原—抗体的特异性结合 C.ADC中接头稳定性偏低，会导致药物分子容易脱落，对正常细胞造成损伤 D.ADC设计需要综合考虑抗体选择、药物分子大小及其细胞毒性等问题 √ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 药物美坦新并不具有识别作用，单克隆抗体才具有识别作用，B错误。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 12.如图，核苷酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶。制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞缺乏转化酶。现用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”来筛选特定的杂交瘤细胞。下列关于筛选原理的叙述，正确的是 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 A.免疫的B淋巴细胞及其相互融合的细胞因全合成途径被A阻断，在HAT 培养基上不能增殖 B.骨髓瘤细胞及其相互融合的细胞因无法进行上述两个途径，而在HAT 培养基上不能增殖 C.杂交瘤细胞因为可进行上述两个途径，能在HAT培养基上大量增殖 D.HAT培养基上筛选出 的所有杂交瘤细胞， 既能大量增殖又能产 生较高纯度的目标抗体 √ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 免疫的B淋巴细胞及其相互融合的细胞是正常细胞，细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，但因高度分化而不能增殖，A错误； 骨髓瘤细胞及其相互融合的细胞因骨髓瘤细胞中缺乏转化酶，无法进行补救合成途径，而在HAT培养基上不能增殖，B正确； 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 杂交瘤细胞因为可进行补救合成途径，能在HAT培养基上大量繁殖，C错误； HAT培养基上筛选出 的杂交瘤细胞能大量 增殖，但并不都能产 生高纯度的目标抗体， 需要进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞，D错误。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 (1)本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自_________________。 人的乳腺癌细胞 13.(2024·成都高二调研)为降低乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体—药物偶联物(ADC)，过程如图1所示。请回答下列问题： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 (2)步骤②的细胞必须经过步骤③才能筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，杂交瘤细胞的特点是_______________________________。杂交瘤细胞可采用注射到小鼠腹腔内培养或进行______培养的方式进行扩大培养。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 既能大量增殖，又能产生特定抗体 体外 综合强化 (3)单克隆抗体的特点是__________________________________________ _______________________________(至少答出两点)。 (4)步骤④是将获得的a____________和b__________________这两部分，通过接头结合在一起，从而获得ADC。 能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备 单克隆抗体 治疗乳腺癌的药物 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 (5)研究发现，ADC在患者体内的作用如图2所示。 ①ADC能降低乳腺癌治疗药物的副作用，是因为____________能精确地定位乳腺癌细胞，该过程依赖于_______________________反应。 单克隆抗体 抗原—抗体的特异性结合 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 ②ADC进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其______，释放出的药物最终作用于________，可导致癌细胞凋亡。 水解 细胞核 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 14.(2023·湖北，22节选)某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。回答下列问题： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 (1)与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫的脾细胞(含浆细胞)________(填“需要”或“不需要”)通过原代培养扩大细胞数量；添加脂溶性物质PEG可促进细胞融合，该过程中PEG对细胞膜的作用是________________ ____________________________________________。 不需要 磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合 使细胞接触处的 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 浆细胞是高度分化的细胞，不能增殖，所以不能通过原代培养扩大细胞数量。脂溶性物质PEG可使细胞接触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 (2)在杂交瘤细胞筛选过程中，常使用特定的选择培养基(如HAT培养基)，该培养基对___________________和________________________生长具有抑制作用。 未融合的亲本细胞 融合的具有同种核的细胞 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 在杂交瘤细胞筛选过程中，常用特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，是运用了抗原—抗体杂交技术，抗体检测呈阳性的细胞，即为所需的杂交瘤细胞。 (3)单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，其目的是__________________________________________________。 通过抗体检测呈阳性来获得分泌所需抗体的杂交瘤细胞 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 综合强化 $